簡(jiǎn)要描述：熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，由于該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前已得到廣泛應(yīng)用;實(shí)時(shí)熒光定量PCR：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，Z后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

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更新時(shí)間：2024-05-13

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產(chǎn)品介紹：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（Real Time Quantitative PCR）

在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，zui后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

相對(duì)定量應(yīng)用（Relative Quantification，RQ）

特異性熒光標(biāo)記：

TaqMan法

TaqMan探針的特性：

（1）5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)（Reporter, R），如FAM、VIC等

（2）3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) （Quencher, Q）

（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收，無(wú)熒光， R與Q分開(kāi)，發(fā)熒光

（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針

相對(duì)定量通過(guò)內(nèi)標(biāo)定量：
內(nèi)標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。

相對(duì)定量分析方法：

2-ΔΔCt
前提：目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100％且偏差在5％以內(nèi)
1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值：
ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test）
ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator）
2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值：
ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
3、計(jì)算表達(dá)水平比率：
2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值

服務(wù)流程：

步驟	客戶提供	服務(wù) 內(nèi) 容	基屹提供
1	新鮮的且盡量多的材料；已知的全長(zhǎng)基因序列；盡可能詳細(xì)的背景資料：DNA/ RNA來(lái)源、豐度等。	DNA/RNA提取，根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)特異性的引物和熒光探針。
2	純化好的DNA/RNA（大于5 ug/樣品）；已知的全長(zhǎng)基因序列；盡可能詳細(xì)的背景資料：DNA/ RNA來(lái)源、豐度等。	根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)特異性的引物和熒光探針。
3		以DNA為模板，對(duì)目的基因進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)分析	提供完整的定量分析結(jié)果、實(shí)驗(yàn)熒光定量擴(kuò)增曲線及詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟。