細胞培養所需的溫度取決于物種的體溫和分離培養細胞類型的微環境

　　細胞培養所需的溫度取決于物種的體溫和分離培養細胞類型的微環境。雖然大多數人類和哺乳動物細胞系在36–37°C下孵育，但源自冷血動物的細胞系可以在15°C至26°C之間的更寬溫度范圍內維持。大多數在實驗室培養的人類和哺乳動物細胞系的pH值應嚴格控制并保持在7.2–7.4的生理pH值。相反，一些成纖維細胞系有利于pH7.4和7.7之間稍微偏堿性的條件，而轉化細胞系更喜歡pH7.0和7.4之間的偏酸性環境。
　　通過嚴格調節和監測細胞培養環境溫度的振蕩培養箱，可以實現細胞培養的恒定溫度。隨著細胞的繁殖，它們的生長需要在培養基中提供能量，例如以葡萄糖的形式。代謝時，其副產物包括丙酮酸、乳酸和CO2。大規模細胞培養時可以使用乳酸檢測儀進行乳酸含量檢測。由于pH值取決于CO2和HCO3-（碳酸氫鹽）的平衡，因此向細胞培養基中添加基于碳酸氫鹽的緩沖液也可以平衡CO2濃度。其他pH緩沖液可以是有機性質的，包括4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)(10–25mM)或3-(N-嗎啉代)丙磺酸(MOPS)(20mM)。
　　許多細胞培養基含有pH指示劑（例如，酚紅），顯示酸性（黃色）和堿性（粉紅色）條件之間的顏色范圍。此外，大氣中CO2濃度的波動也可以改變pH水平。因此，細胞應在培養箱中培養，該培養箱還允許將CO2張力調整至5–7%。為了延遲pH值的變化，可以用其他碳源（例如半乳糖或果糖）代替葡萄糖。雖然這會減慢細胞生長的速度，但也會減少乳酸等副產物的積累。對于在低氧張力（缺氧）下模擬病理或生理條件的特定細胞培養物，建議使用可調節的1–21%氧濃度與氮氣平衡的缺氧培養箱。蘇州阿爾法的葡萄糖乳酸分析儀、生物反應器、恒溫恒濕培養箱細胞培養搖瓶等廣泛用于細胞培養。